Книга известного ученого Л. А. Остермана посвящена введению в экспериментальные методы молекулярной биологии. Она предназначена для студентов биологических специальностей и учащихся специализированных классов.
   Трехтомное руководство для экспериментаторов “Methods of Protein and Nucleic Acid Research” того же автора было выпущено издательством Springer-Verlag в 1986 году. Оно имеется во всех крупных биохимических лабораториях мира.
   В настоящем издании отражены в доступной форме методические новинки, появившиеся за прошедшие с тех пор 15 лет.

Оглавление

Введение 7
§ 1. Белки 8
§ 2. ДНК 10
§ 3. РНК 14

Глава 1. Основные понятия молекулярной биологии 18
§ 1. Атомы, силы взаимодействия 18
§ 2. Белковая глобула, аминокислоты 24
§ 3. Химия нуклеиновых кислот 32
§ 4. Механизм редупликации ДНК 37
§ 5. Транскрипция ДНК 43
§ 6. Трансляция иРНК. Регулирование белкового синтеза 47

Глава 2. Выделение и очистка суммарных фракций белков и нуклеиновых кислот 57
§ 1. рН и буферные растворы 57
§ 2. Некоторые активные вещества — добавки 66
§ 3. Вскрытие клеток 69
§ 4. Дифференциальное центрифугирование 71
§ 5. Выделение суммарных фракций белков послецентрифугирования 72
§ 6. Выделение суммарных препаратов ДНК и РНК 73

Глава 3. Методы генной инженерии 76
§ 1. Рестриктазы 76
§ 2. Плазмиды 78
§ 3. Встраиваете фрагментов чужеродной ДНК в плазмиду 80
§ 4. Некоторые приемы экспериментальноймикробиологии 82
§ 5. Искусственный синтез олигонуклеотидов 84
§ 6. Секвенаторы белков 85

Глава 4. Умножение количества индивидуального белка 88
§ 1. Воспроизводство “значащей” части гена по известной иРНК 88
§ 2. ЧИП-методика 90
§ 3. Замечания в дополнение. Пипетки 95

Глава 5. ПЦР-реакция. Автоматическое умножение количества индивидуальной ДНК 97
§ 1. ПЦР-реакция 97

Глава 6. Электрофорез 104
§ 1. Введение в метод электрофореза 104
§ 2. Электрофорез белков (общие положения) 107
§ 3. Полиакриламидный гель (ПААГ) 112
§ 4. Электрофорез белков в вертикальных пластинах 115
§ 5. Загрузка геля, ширина белковых полос 119
§ 6. Фиксация и окрашивание белков в геле 122
§ 7. Разделение белков по размерам с использованием DDC-Na 124
§ 8. Двумерный эклектрофорез в ПААГ 126
§ 9. Извлечение белков из геля после электрофореза 127
§ 10. Электрофорез нуклеиновых кислот 128
§ 11. Гели агарозы 130
§ 12. Влияние вторичной структуры ДНК 132
§ 13. Элюция нуклеиновых кислот из геля агарозы 134

Глава 7. Секвенирование ДНК 137
§ 1. Первоначальные способы неавтоматического секвенирования ДНК 137
§ 2. Автоматическое секвенирование (принцип) 142
§ 3. Практические аспекты автоматического секвенирования 143
§ 4. Автоматический секвенатор 147

Глава 8. Ультрацентрифугирование 155
§ 1. Ультраценрифуга 155
§ 2. Скорость осаждения частиц 157
§ 3. Константа седиментации 160
§ 4. Раздельное осаждение частиц 161
§ 5. Зонально-скоростное ультраценрифугирование 162
§ 6. Равновесное ультрацентрифугирование 167

Глава 9. Техника жидкостной колоночной хроматографии 171
§ 1. Хроматографические колонки низкого давления 171
§ 2. Перистальтический насос 177
§ 3. Детекторы вещества 179
§ 4. Коллекторы фракций 180
§ 5. Аппаратура для жидкостной хроматографии высокого давления (HPLC) 181

Глава 10. Гель-фильтрация 184
§ 1. Общее описание метода 184
§ 2. Основные материалы гранул (“матриц”) для гель-фильтрации 188
§ 3. Гели на основе целлюлозы 190

Глава 11. Ионообменная хроматография 191
§ 1. Подвижная и неподвижная фазы 191
§ 2. Ионогенные группы 192
§ 3. Ионы и контрионы 194
§ 4. Хроматографическое фракционирование белков 196
§ 5. Выбор условий хроматографии 199
§ 6. Градиентная элюция 202
§ 7. Возможности ионообменной хроматографии 203

Глава 12. Распределительная хроматография 205
§ 1. Гидрофобизированные матрицы сефарозы 207
§ 2. Система ХОФ-5 208

Глава 13. Аффинная хроматография 211
§ 1. Общая характеристика метода 211
§ 2. Активированные матрицы и спейсеры 214
§ 3. Лиганды 216
§ 4. Некоторые примеры использования аффинной хроматографии 218

Глава 14. Иммунохимические методы 221
§ 1. Иммунная система 221
§ 2. Аффинные иммуносорбенты 225
§ 3. Отыскание антигена после электрофореза смеси белков 230

Глава 15. Использование радиоактивных изотопов 232
§ 1. Радиоактивные изотопы, используемые в биологии 232
§ 2. Авторадиография 236
§ 3. Сцинтилляционные счетчики излучения 237
§ 4. Счет радиоактивности на фильтрах 242
§ 5. Введение радиоактивной метки  в биологические препараты 245

Формат: DJVU
Язык: Русский

Скачать учебник
Методы исследования белков и нуклеиновых кислот (Остерман Л.А.)